基于活性的蛋白质分析（Activity-Based Protein Profiling，ABPP）是通过检测和分析蛋白质的活性来研究其功能、机制及其在生物体中的作用。ABPP 利用小分子探针与蛋白质活性位点特异性结合的特性，将活性蛋白质标记并富集出来，然后通过各种分析技术对其进行鉴定和功能研究。这些小分子探针通常由三部分组成：与活性位点特异性结合的反应基团、连接臂和可检测或可富集的标签。反应基团能够与目标蛋白质活性位点的特定氨基酸残基发生共价或非共价相互作用，从而使探针特异性地结合到活性蛋白质上。连接臂用于连接反应基团和标签，起到空间位阻调节和增强探针稳定性的作用。标签则用于后续的检测、富集或定量分析，如荧光标签可用于直接观察蛋白质的活性分布，生物素标签可用于通过亲和纯化富集目标蛋白质。基于活性的蛋白质分析的应用领域极为广泛。在医药领域，这一技术可用于药物靶点的鉴定与验证，帮助研发人员设计出更具针对性的治疗药物。在农业领域，基于活性的蛋白质分析可用于研究植物抗病基因的功能，进而培育出抗病性更强的作物。在环境科学中，该技术也被用于检测环境中的毒性物质对生物体的影响。此外，基于活性的蛋白质分析还可用于食品工业中检测食品的营养成分及其活性，从而保证食品的安全与质量。

一、基于活性的蛋白质分析主要类型

1、基于亲电试剂的 ABPP

许多酶的活性位点含有亲核氨基酸残基，如丝氨酸、半胱氨酸等。基于亲电试剂的 ABPP 探针含有亲电反应基团，如环氧基、卤代乙酰基等，能够与这些亲核残基发生共价反应，从而特异性地标记活性酶。

2、基于底物类似物的 ABPP

此类探针是根据酶的天然底物结构设计的，它们与底物具有相似的结构特征，能够被酶识别并结合到活性位点，但在反应过程中不会像天然底物那样被完全转化，而是与酶形成稳定的复合物，从而实现对活性酶的标记。

3、基于辅因子类似物的 ABPP

对于一些需要辅因子参与催化反应的酶，可以设计与辅因子结构相似的探针。这些辅因子类似物探针能够与酶的辅因子结合位点特异性结合，进而标记具有活性的酶蛋白。

二、基于活性的蛋白质分析操作流程

1、探针设计与合成

根据目标蛋白质的活性位点结构和作用机制，设计并合成具有特异性反应基团和合适标签的 ABPP 探针。

2、细胞或组织处理

将细胞或组织样本与 ABPP 探针在适宜的条件下孵育，使探针与活性蛋白质充分结合。对于细胞样本，可以直接将探针加入到细胞培养液中；对于组织样本，可能需要进行切片或匀浆等预处理后再与探针孵育。

3、标记与富集

利用标签的特性对标记后的蛋白质进行富集或检测。如果使用生物素标签，可以通过链霉亲和素磁珠或亲和柱进行亲和纯化，富集标记的蛋白质；如果使用荧光标签，可以通过荧光显微镜或流式细胞术等直接观察或分析标记蛋白质的分布和表达情况。

4、蛋白质鉴定与分析

对富集后的蛋白质进行质谱分析，鉴定蛋白质的种类和修饰位点。还可以结合蛋白质印迹、免疫共沉淀等技术，进一步验证和分析标记蛋白质的表达水平、相互作用蛋白等。

三、基于活性的蛋白质分析应用场景

1、酶活性检测与功能研究

可以快速筛选出具有特定酶活性的蛋白质，研究酶在不同生理或病理条件下的活性变化及其在信号通路中的作用。

2、药物靶点发现与验证

通过比较正常细胞和疾病细胞中活性蛋白质的差异，发现潜在的药物作用靶点。同时，在药物研发过程中，ABPP 可用于验证药物是否作用于预期的靶点以及评估药物对靶点活性的影响。

3、蛋白质翻译后修饰研究

一些 ABPP 探针可以特异性地标记发生特定翻译后修饰的蛋白质，有助于深入了解翻译后修饰对蛋白质活性和功能的调控机制。

基于活性的蛋白质分析仍存在探针特异性、复杂生物体系干扰、技术复杂性等局限性。设计的探针可能存在非特异性结合的问题，导致假阳性结果，影响对目标蛋白质的准确分析。在复杂的细胞或组织环境中，可能存在多种因素影响探针与目标蛋白质的结合效率，如蛋白质的空间构象变化、其他蛋白质或小分子的竞争结合等。此外，ABPP 技术涉及到探针设计与合成、细胞生物学、蛋白质化学和质谱分析等多个领域的知识和技术，操作过程较为复杂，需要专业的技术人员和设备。百泰派克生物科技以其专业的蛋白质分析服务和卓越的技术获得了客户的广泛认可。我们拥有一支经验丰富的科研团队，能够为客户提供从样品制备到数据分析的一站式服务。我们的服务不仅涵盖常规的基于活性的蛋白质分析项目，还包括定制化的研究方案，以满足客户的不同需求。欢迎与我们合作，共同推动科学研究的边界。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目