产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.适用范围广：通过荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱分析和荧光酶标仪等，监测细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化

3.线粒体靶向性：通过膜电位依赖富集于线粒体中，避免与其他细胞器（如内质网）交叉标记

产品介绍

钙离子检测在众多生物学研究中至关重要。能够与Ca²⁺结合并产生光谱响应的荧光探针，使研究人员得以通过荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱分析和荧光酶标仪等技术手段，监测细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化。对于存在较强自发荧光的细胞和组织样本，长波长钙指示剂Rhod-2可作为Fluo-3的理想替代选择。其中Rhod-2 AM是该探针的细胞膜渗透性衍生物。

实验方案

溶液配制

1.储备溶液配制

Rhod-2 AM 储备溶液

在无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Rhod-2 AM 储备溶液。

2.工作溶液配制

Rhod-2 AM 工作溶液

1.实验当天，将 Rhod-2 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.选择合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）配制2-20 µM Rhod-2 AM工作液，并添加0.04% Pluronic® F-127表面活性剂。对于大多数细胞系，推荐使用4-5 μM终浓度的Rhod-2 AM。具体染料加载浓度需通过实验优化。

注意：非离子型表面活性剂 Pluronic® F-127可增强Rhod-2 AM水溶性。可以从百萤购买购买。

注意：若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是推荐的Rhod-2 AM加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

1.将细胞在生长培养基中培养过夜。

2.次日，将 1X Rhod-2 AM 工作溶液添加到细胞孔板中。

注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3.将载有染料的孔板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间至1小时以上可增强信号强度

4.用 HHBS 或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

5.根据需要添加刺激剂，同时使用配备 TRITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 540/590 nm 处进行荧光监测。