Annexin V 荧光染料是细胞生物学和医学研究中用于检测细胞凋亡的核心工具之一。它是膜联蛋白家族中的一种细胞蛋白，该家族蛋白质具有钙离子依赖性结合阴离子磷脂的特性。虽然其具体细胞功能尚未完全阐明，但现有研究表明其主要参与凝血过程。在细胞健康状态分析中，膜联蛋白V通过特异性结合磷脂酰丝氨酸（PS）来识别凋亡细胞。PS原本存在于细胞膜内侧小叶，当细胞启动凋亡程序时，PS会外翻至细胞膜外侧。为便于检测和定量，膜联蛋白V偶联物通常标记有荧光素、藻胆蛋白或半抗原分子（如生物素）。

核心功能

 1.特异性结合磷脂酰丝氨酸： Annexin V 是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白，对细胞膜磷脂酰丝氨酸具有极高的亲和力和特异性。

2.标记凋亡细胞： 在健康的活细胞中，磷脂酰丝氨酸主要分布在细胞膜的内侧（胞质面）。在细胞凋亡的早期阶段，磷脂酰丝氨酸会从细胞膜内侧翻转到外侧（暴露在细胞表面）。Annexin V 荧光染料能够结合到这些暴露在外侧的磷脂酰丝氨酸上，从而将凋亡细胞（尤其是早期凋亡细胞）标记出来。

3.区分凋亡阶段： 通常需要与另一种染料 碘化丙啶 结合使用：

Annexin V 阳性 / PI 阴性： 早期凋亡细胞 (细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻，但细胞膜完整性尚存，PI 无法进入)。

Annexin V 阳性 / PI 阳性： 晚期凋亡或坏死细胞 (细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻，且细胞膜完整性丧失，PI 可进入细胞核染色)。

Annexin V 阴性 / PI 阴性： 活细胞 (磷脂酰丝氨酸不外翻，细胞膜完整)。

Annexin V 阴性 / PI 阳性： 坏死细胞或机械损伤细胞 (磷脂酰丝氨酸可能未及时外翻或外翻程度低，但膜已破损。这种情况相对少见，更常见的是双阳性)。

主要优势

 1.早期检测： 能够检测凋亡过程中发生得非常早的事件——磷脂酰丝氨酸外翻，远早于细胞形态发生显著改变或 DNA 断裂。这对于研究凋亡的起始机制至关重要。

2.高灵敏度和特异性： Annexin V 对其靶点磷脂酰丝氨酸具有高度特异性和亲和力，能可靠地区分凋亡细胞和健康活细胞。

3.定量分析： 尤其是与流式细胞术结合时，可以对群体中处于不同凋亡阶段（早期凋亡、晚期凋亡/坏死）的细胞比例进行精确的定量分析。

4.区分凋亡与坏死： 与 PI 等膜不通透性核酸染料联用，是区分凋亡（尤其是早期）和坏死的最常用且有效的方法之一。

5.操作相对简便快速： 标准的 Annexin V/PI 染色流程相对简单，通常可在 1-2 小时内完成，适用于高通量筛选。

6.多种检测平台兼容

流式细胞术： 最常用、最强大的定量分析方法。

荧光显微镜： 可进行形态学观察和定位，适用于贴壁细胞或需要观察单个细胞的情况。

荧光微孔板读数仪： 适用于高通量筛选，提供群体水平的荧光强度信息。

激光共聚焦显微镜： 提供高分辨率的三维成像。

7.适用于多种细胞类型： 可用于悬浮细胞、贴壁细胞、原代细胞、细胞系等多种样本。

Annexin V 荧光染料凭借其特异性结合凋亡细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸的核心功能，具有早期检测、高灵敏特异、定量分析、区分凋亡/坏死、操作简便、平台兼容性好等显著优势。它被广泛应用于基础生命科学研究和应用医学研究的众多领域，特别是在细胞凋亡检测、抗肿瘤药物筛选与机制研究、毒理学评估等方面发挥着不可替代的作用。与膜完整性染料（如 PI）的联合使用是其标准应用模式。